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肽“尾”则是通过D-乳酰羧基连在NAM的第3位碳原子上,肽尾之间通过肽“桥”(肽键或少数几个氨基酸)连接,NAM、NAG、肽“尾”与肽“桥”共同组成了肽聚糖的多层网状结构,作为细胞壁的骨架,上述结构中的任何化学键断裂,皆能导致细菌细胞壁的损伤。对于革兰氏阳性菌(G+),如藤黄微球菌、枯草杆菌或溶壁微球菌等,与革兰氏阴性菌(G-),如大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、杆菌等,其细胞壁中肽聚糖含量不同,G+细菌细胞壁几乎全部由肽聚糖组成,而G-细菌只有内壁层为肽聚糖,因此,溶菌酶对于破坏G+细菌的细胞壁较G-细菌强。目前溶菌酶可以以鸡蛋清和蛋壳膜为材料提取制得,常用的方法有亲和层析法、离子交换树脂法、直接结晶法和聚丙烯酸沉淀法等。
离心去除。上清液在缓缓搅拌下,加NaCl至5%,静置一周,得粗结晶。结晶溶于pH4.6醋酸水中,分去不溶物后,进行重结晶,结晶的终得率为60%左右。即每公斤蛋清中可得重结晶品近1.3g,活力测定为8000U/mg。聚丙烯酸沉淀法为将提取过滤后含酶洗脱液,首先经过吸附步骤,即将过滤后的澄清溶液用20%的NaOH溶液调pH至6.0,在调pH值的过程中不停的搅拌。有少量的沉淀析出,然后加入15%聚丙烯酸,立即有白色沉淀析出,加至pH值为3.0为止,静置17个小时进行静析,,得到粘附于底部的胶状物。第二步解离,将前步得到的溶菌酶聚丙烯酸凝聚物。加入少量蒸馏水并用0.5mol/L的碳酸钠,将其溶解,转移后。
定向筛选,选育出高产果胶酶菌株YS-435;并对传统工艺进行了改进,以二级发酵菌丝体接种代替孢子悬浮液直接接种和采用稀醪发酵,适时限量补料,控制pH值的办法,提高发酵单位20%,缩短发酵周期34小时;并把二滤除菌技术应用于食品级果胶酶生产,开发出食品级果胶酶产品,形成一套完整的果胶酶生产工艺技术。一种双水相萃取体系分离纯化果胶酶的方法:首先将聚乙二醇、硫酸铵和水混合制成混合溶液,然后将混合溶液振荡摇匀,静置分相后再加入果胶酶液,振荡摇匀,在室温下萃取分相,分离上相液聚乙二醇备用;将分离的上相液聚乙二醇、酒石酸钾钠和水混合,在室温下进行反萃取,果胶酶大部分集中在下相水相中,将下相分离出,采用膜过滤。
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